革蘭氏染色液試劑盒革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法,通過(guò)結(jié)晶紫初染和碘液媒染后,在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物,革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁較厚,肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密,乙醇脫色時(shí),肽聚糖脫水使孔徑縮小,故保留結(jié)晶紫-碘復(fù)合物在細(xì)胞膜上,呈紫色。革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差,脫色后類脂外膜迅速溶解,縫隙加大,結(jié)晶紫與碘復(fù)合物溶出,因此乙醇脫色后再經(jīng)番紅復(fù)染,呈紅色。
革蘭氏染色液試劑盒的操作步驟:
1.涂片固定:菌液涂片時(shí)不可過(guò)于濃厚,干燥、固定。固定時(shí)通過(guò)火焰1-2次即可,不可過(guò)熱,以載玻片不燙手為宜。
2。染色:一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟,具體操作方法是:加上結(jié)晶紫后,染色,水洗。加上碘液后染色,水洗。加上酒精,搖動(dòng)玻片,根據(jù)涂片厚度,脫色,水洗,吸去水分。加上蕃紅后,染色,水洗。吸干或在空氣中涼干后,油鏡鏡檢。
3.結(jié)果觀察:革蘭氏陰性菌呈紅色,革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色。以均勻分散開(kāi)的細(xì)菌的革蘭氏染色反應(yīng)為準(zhǔn),過(guò)于密集的細(xì)菌,常常呈現(xiàn)假陽(yáng)性。
革蘭氏染色液試劑盒革蘭氏染色的關(guān)鍵在于嚴(yán)格掌握酒精脫色程度,如脫色過(guò)度,則陽(yáng)性菌可被誤染為陰性菌;而脫色不夠時(shí),陰性菌可被誤染為陽(yáng)性菌。此外,菌齡也影響染色結(jié)果,如陽(yáng)性菌培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),或已死亡及部分菌體自行溶解,都常呈陰性反應(yīng)。