MRS瓊脂是一種常用于乳酸菌選擇性培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基。以下是
MRS瓊脂的制備步驟:
1、準(zhǔn)備所需材料:蒸餾水、磁力攪拌器、pH計、高壓滅菌鍋、無菌操作臺、培養(yǎng)皿等。
2、稱量:根據(jù)實驗需要,稱取適量的瓊脂粉。通常,每升蒸餾水需要加入135克瓊脂粉。
3、溶解:將稱好的加入蒸餾水中,使用磁力攪拌器攪拌均勻,直至溶解。注意不要加熱過快,以免影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。
4、調(diào)節(jié)pH值:使用pH計測量溶液的pH值,根據(jù)推薦pH范圍(通常為5.7±0.2),用稀鹽酸或稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值。調(diào)節(jié)過程中要緩慢滴加,避免pH值波動過大。
5、高壓滅菌:將調(diào)好pH值的溶液倒入高壓滅菌鍋中,進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。通常,滅菌條件為121℃,15分鐘。滅菌完成后,待壓力降至安全范圍內(nèi),方可打開鍋蓋。
6、倒平板:在無菌操作臺上,將滅菌后的溶液倒入無菌的培養(yǎng)皿中,每個培養(yǎng)皿約倒入15-20毫升。倒完平板后,輕輕搖晃培養(yǎng)皿,使瓊脂均勻分布。
7、凝固:將倒好的平板放置在室溫下,待瓊脂凝固。凝固時間通常為15-30分鐘。凝固后的平板可立即使用,也可放入4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br />
8、儲存:未使用的平板應(yīng)儲存在4℃冰箱中,避免長時間暴露在高溫和潮濕環(huán)境中,以免影響其質(zhì)量。
在制備MRS瓊脂的過程中,需要注意以下關(guān)鍵步驟:
1、確保所用材料和器具的無菌性,避免污染。
2、溶解時,要確保充分?jǐn)嚢?,使其溶解?br />
3、調(diào)節(jié)pH值時,要緩慢滴加稀鹽酸或稀氫氧化鈉溶液,避免pH值波動過大。
4、高壓滅菌時要確保滅菌條件達(dá)到要求,以保證培養(yǎng)基的無菌性。
5、倒平板時要在無菌操作臺上進(jìn)行,避免污染。
6、凝固后的平板要及時使用或儲存在4℃冰箱中,避免長時間暴露在高溫和潮濕環(huán)境中。
總之,在制備MRS瓊脂的過程中,要嚴(yán)格遵循操作規(guī)程,確保培養(yǎng)基的質(zhì)量和無菌性,為乳酸菌的選擇性培養(yǎng)提供良好的基礎(chǔ)。